شناسایی سویه غیر معمول بروسلا(BO2) از بیوپسی ریه بیمار مبتلا به پنومونی مزمن
بحث:
سویه شبه بروسلا آتیپیک (BO2) از بیوپسی ریه بیمار مرد ۵۲ ساله جدا و شناسایی شدهاست. بیمار بهعنوان فردی جوان در دو موقعیت سالهای1981و 1985 تا 1987 در اورگون زندگی کرده، و نارسایی کبدی باعلت نامشخص و بعد پنومونی شدید (باپلورزی) را از سر گذرانده و طبق گفتهی بیمار به پزشکان در استرالیا با چندین دوره مصرف آنتیبیوتیک درمان شده بود. در اصل بیماری این فرد غلط تشخیص داده شده چون سویه BO2 بهعنوان آکروباکتروم آنتروپی درنظر گرفته شده بود. باوجودی که شناسایی گونههای بروسلا از کشت خون برای آزمایشگاههای تشخیص طبی چندان مشکل نبوده، لیکن اغلب گونههای بروسلا بهعلت ویژگی فنوتیپی مشابه آنها با باکتریهای وابسته نزدیک چون گونههای آکروباکتروم به غلط شناسایی میشوند اگرچه بهعلت مشکلات تشخیصی بیمار برای هردو نوع عفونت بروسلا وآکروباکتروم تحتدرمان قرارگرفته بود، لیکن با سیر طولانی مصرف توأم آنتیبیوتیکهای خوراکی معالجه شد.
این سویهBO2 ازنظر فنوتیپی و مولکولی مشابه تیپ سویه اخیراَ جداشده بروسلا اینوپنیاتا (BO1T) از بیماری در اورگون بوده، که آن مورد نیز ابتدا به غلط عفونت آکروباکتروم آنتروپی تشخیص داده شده بود. هردو سویه ازنظر مورفولوژی و مشخصات بیوشیمیایی چون اورهآز سریع و تولید گاز H2S، عدم آگلوتیناسیون یا آگلوتیناسیون بسیار ضعیف با آنتی سرمهای اسپسفیک گونههای بروسلا برای آنتــیژن زنجیره O ـ لیپوپلی ساکارید یا واکنش با آکریفلاوین مشابه هستند. هیچکدام از دو سویهی BO1T و BO2 تشکیل ژل نداده یا ممانعت رشد در محیطهای رنگی را نشاننمیدهند. سویه BO2 نیز بهوسیلهی فاژ Tb بهطور ناقص لیز شده و الگوی حساسیت به آنتیبیوتیکهای آن درمقایسه با دیگر سویههای رفرانس بروسلا بسیار شبیه سویهBO1T میباشد.
ساختار ژنومی و موقعیت جایگاه اجزای ژنی گونههای بروسلا اختصاصی گونهای مرتبط با بیماریزایی اختصاصی برای میزبان ترجیحی شناخته شدهاست و وجود وضعیت مشابه در سویه BO2 نهتنها این سویه را در جنس بروسلا قرارداده، بلکه تشابه بسیار زیاد آن را با گونهی جدیداَ توصیف شده بروسلا اینوپیناتا نشان داده است. هردو سویههایBO1T و BO2 عامل اشکال متمایز و غیرمعمول بروسلوز انسان بودهاند. در هرمورد تشخیص اولیه نادرست بوده است. جالبتوجه آنکه طول کامل ترادف ژن16srRNA سویه BO2 بهطور 100٪ با سویهBO1T و ۹۹/۶٪ با دیگر گونههای بروسلا همانند میباشد. همانندی بالای 16srRNA سویه BO2 با بروسلا اینوپیناتا به ثبوت رسیـده و اولـین گونه بروسـلا شناخته شـده با 16srRNA متفاوت را نشان میدهد.
ژن recA بهعنوان شاخص فیلوژنتیک برای چندین جنس از باکتریهای در ارتباط با ماهیت ثابت بالای آن در پروکاریوتها مورد بررسی قرارگرفته است. برخلاف هومولوژی موجود ژن recA در درون جنس بروسلا، تغییرپذیری مشخص و منحصر به فرد آن در سویههای BO1T و BO2 مشاهده میشود. شباهت بیشتر ترادف نوکلئوتید سویه BO2 با recA گونهای بروسلا نسبت به سویه BO1T نشان داده شدهاست. ترادف ژنهای recA هردو سویه BO2 و BO1T با SNPs بینظیر بهترتیب۸ و۱۱ از ژن recA دیگر گونههای بروسلا متفاوت بوده و تنها در موقعیت نوکلئوتید۵۱۷ مشترک میباشند. پروتئینهای غشای خارجی(omps) بروسلاها در ارتباط با نقش آنها در زهرآگینی (حدت)، پاتوژنی سیتی، پذیرش باکتریوفاژ، فاکتورهای آنتی ژنی و گریز یا دفع اثر آنتیباکتریالها، به حد وسیعی مورد بررسی قرارگرفتهاند. تغییرپذیری ژنتیکی در بین ژنهای ompگونههای بروسلا در توصیف گونهها و تیپ سویه مؤثر بوده و اغلب برای تایپینگ مولکولی مورد استفاده میباشد. آنالیز ژنتیکی omp2b/omp2a سویه BO2 نهتـنها ارتباط با سویـهBO1T بلکه ســویه آتیپیک ۲۱۰ ـ ۸۳ بروسلا سوئیس (جدا شده از یک جونده در استرالیا) را نشانداده است.
در بررسی مجموعهی 9ژن سویههای مختلف نشانداد که BO2 ازنظر ژنتیکی متمایز ازBO1T با اختلاف مشابه (۱/۵٪) از تیپهای کلاسیک بروسلا میباشد. تشابه نسبی ترادف نوکلئوتیدهای BO1T و BO2 به گروهبندی جدید آنها در جنس بروسلا نتیجه داده است. علاوهبر آن ازنظر فیلوژنتیکی نیز این این سویهها دستهی جداگانهای از گونههای کلاسیک بروسلاها را تشکیل میدهند.
شواهد حاصله از ویژگیهای مولکولی و میکروبیولوژی حاکی از آن است که سویه BO2 نزدیکترین وابستگی را با سویهBO1T داشته و باید بهعنوان سویهی جدید از بروسلا اینوپیناتا درنظر گرفتهشود. شناخت منشای تکاملی ایندو سویه در ارتباط با تاریخچهی جالب و نامتجانس بیماران موردی (که در هردو مورد بیماران در پورتلند، اورگون، زندگی کردهاند) با جداسازی این سویهها از آنها تاحدی مغشوش بوده و قابلیت ظهور سویههای جدید و نوپدید بروسلا را از تظاهرات غیرمعمول بروسلوز انسان پیشنهاد مینماید.
نتیجه:
آنالیز فنوتیپی وژنومی سویه غیرمعمول بروسلا (BO2) از بیوپسی ریه را بهعنوان سویهای از گونهی جدید بروسلا اینوپیناتا تا تیپ سویه BO1T ، جداشده از زخم مرتبط با پیوند پستان، قرارداده است. این بررسی اولین مورد گزارشی از بروسلوز انسان در ارتباط با پنومونی مخرب مزمن ناشیاز سویه غیرمعمول بروسلا میباشد. هردوسویه BO1T و BO2 دقیقاَ به سویهی کمتر شناخته شده ۲۱۰-۸۳ بروسلا سوئیس (جداشده از یک جونده در استرالیا) ازطریق ژنهای omp2b,omp2a وابسته بوده، که ممکناست برنیای مشترک آنها اشـاره داشته و هـم چنـین ممکناسـت دورنمای موقعیت بوم شناختی و میزبان مخـزن برای این سویـههای جدید بـروسلا عامل عفـونتهای غیرمعمول در انسان را فراهم سازد.
روشهای بررسی
بیمار:
بیمار در سال1956 در جزیره مالت متولد شده، در سن ۲سالگی به استرالیا مهاجرتکرده، کشوری که بعداَ بهطور مرتب در رفت و آمد داشته و سرانجام در سراسر جهان ازجمله ناحیهی غرب ایالات متحدهی آمریکا مسافرتکرده است.
بین سالهای ۲۰۰۳ و ۲۰۰۷، بیمار چندین بار در بیمارستانهای مختلف استرالیا برای نارسایی غیرطبیعی کبد، پنومونی اکتسابی، آبسههای دیوارهی قدامی سینه و عفونت سینوس بستری بوده است. در سپتامبر سال۲۰۰۷ بیوپسی ریه ازطریق زیرپوستی انجامشده و باکتری گرم منفی از کشت براساس مواد برداشتی از ریهی بیمار با سوزن نازک(FNA) جدا گردیده و در سیستم API2ONE بهعنوان آکروباکتروم آنتروپی شناسایی شد. آزمایشگاه از احتمال تشخیص نادرست گونه بروسلا بهعنوان آکروباکتروم آنتروپی آگاه بوده و سویهی جداشده برای آزمایش بیشتر مورد بررسی قرارگرفت. بیمار با مصرف توام داکسیسیکلین و ریفامپسین برای مدت ۱۲ماه و سیپروفلوکساین بهمدت3ماه (داروی اخیر بعداز تأیید آزمایش مولکولی تشخیص گونه بروسلا قطع شد) تحتدرمان قرارداده شد. در ابتدا کشت باکتری برطبق روشهای استاندارد و میکروبیولوژی و مولکولی انجام شده و بعد جهت بررسی بیشتر به مرکز کنترل و پیشگیری بیماریها در آتلانتا، جورجیا، (CDC,Atlanta,GA) ارسال گردید. باکتری گرم منفی بهعنوان سویه BO2 شناسایی شده و تا ارزیابی بیشتر با خون دفیبریـنه خرگوش در ۷۰- درجـه سانتیگــراد حفظ گردید.
آنالیز فنوتیپی:
سویه BO2 درمحیط تریپتی کیس سوی آگار با ۵٪ خون دفیبرینه گوسفند(SBA) یا خرگوش (RBA) بهخوبی حفظ میشود. شناسایی فنوتیپی سویه BO2 برطبق تکنیکهای آزمایشگاهی توصیفی آلتون و همکاران درمونوگرام سازمان جهانی بهداشت (WHO) انجام پذیرفت. آزمایش حساسیت به آنتیمیکروبیال سویهBO2 با روش رقت میکرد براس در براس مولرـ هینتون (CAMHB) و بروسلا براس برطبق پروتکل انستیتو استانداردهای بالینی و آزمایشگاهی (CLSI) صورت گرفت.
آنالیز مولکولی:
روشهای بررسی مولکولی و آزمایشهایReal tine, PCR PCR, MLSA, MLVA براساس بعضی منابع ذکر شده انجام پذیرفته است.
