بیماریهای قابل انتقال بین انسان و حیوان (زئونوزها) (۱۱)

جنس بروسلا در سال1920 به‌وسیله‌ی میروشاو با بروسلا ملی‌تنسیس عامل سببی تب‌مالت به‌عنوان تیپ گونه‌ و بروسلا آبورتوس عامل سقط جنین درگاو به‌عنوان گونه‌ی دوم تشکیل شد. درخلال 48‌سال بعد چهارگونه دیگر بروسلا، یعنی بروسلا سوئیس، بروسلا اوویس، بروسلانئوتومه و بروسلاکنیس توصیف‌شده و درجنس بروسلا قرارگرفتنـد. تـقریباً 40 سال دیگر طـول کشید تا دوگـونه‌ی جدید بروسلا پینی‌پــدیالیس و بــروسلاستی با منشاء پستــانداران دریــایی توصیف شـدند. اخیــراً نیــز گــونه‌ی‌ دیــگری از بـــروسلا، یعنــی بروسلامیــکروتی، دراصل از مـوش‌های میکروتـوس آروالیس در جمهوری چک و همچنین روباه‌های قرمز وولپس در نواحی پست‌تر اتریش و نیز به‌طور مستقیم از خاک جدا‌شده و به‌عنوان گونه‌ی جدید شناخته شده‌است.

پیش‌از توسعه‌ی تکنیک‌های مولکولی، تشخیص افتراقی گونه‌های مختلف بروسلا و بایووارهای آنها بر‌اساس خصوصیات فنوتیپی، یعنی نیاز به گاز CO₂ جهت رشد، تولید گاز H2S، حساسیت به‌رنگ، الگوی متابولیک، لیز به‌وسیله‌ی باکتریوفاژهای اختصاصی بروسلا وآگلوتیناسیون با آنتی‌سرم‌های مونو ـ اسپسفیک قرار‌داشته است. معیار مهم دیگر برای تمایز گونه‌های مختلف بروسلا میزبان طبیعی ترجیحی بوده، که اسامی گونه‌ها برطبق میزبان ترجیحی اطلاق شده بود. امروزه به‌خوبی شناخته‌شده که تمامی گونه‌های بروسلا درسطح ژنتیکی به یکدیگر وابسته بوده، ترادف همانند ژن‌های 16s‌rRNA و recA را نشان داده و تشابه بسیار بالای ژنوم‌ها را برحسب همسانی ترادف نوکلئوتیدها و ژن دارا می‌باشند. در اکثر ژن‌ها تنها پلی‌مورفیسم‌های واحد نوکلئوتید در بین گونه‌های مختلف بروسلا وجود دارند. در واقع، با به کارگیری استاندارد طلایی برای توصیف گونه‌ها، یعنی هیبریدیزاسیون DNA-DNA، تمامی گونه‌های شناخته شده بروسلا به گونه‌ی واحدی تعلق داشته، چون وابستگی DNA-DNA دربین تمامی گونه‌ها بالای‌70٪ است. نتیجتاً، ورژه و همکاران درسال‌1985 بروسلا را به‌عنوان جنس مونواسپسفیک با بروسلا ملی‌تنسیس به مثابه تنها گونه‌ی واقعی و دیگر گونه‌ها به‌صورت بایووارهای آن پیشنهاد نمودند. بعداً این استنباط با یافته‌های حاصل ازبررسی مقایسه‌یی ژنوم کامل بروسلا ملی تنسیس، بروسلا سوئیس، واخیراً سویه 941ـ9 بروسلا آبورتوس و سویه واکس S.19 بروسلا آبورتوس مورد تأیید قرارگرفت.

با‌وجود این، درسال‌2003 زیر کمیته‌طبقه‌بندی بروسلا به اتفاق آراء بازگشت به طبقه‌بندی پیش‌از سال‌1986 را مورد موافقت قرارداده و شش‌گونه نامگذاری شده و بایووارهای آنها را تأیید نمود (اجلاس شهر پامپلونای اسپانیا درسال‌2003) که نهایتاً به وسیله اوسترمن و موریون درسال 2006 انتشار یافت.

با استفاده از طبقه‌بندی جاری بروسلا گونه‌ی جدید بروسلا اینوپیناتابا تیپ سویه BO1T (جدا‌شده ازمایع و خون زخم پیوند‌پستان خانم بیمار 71 ساله با نشانی‌هایی بالینی منطبق با بروسلوز) درسال 2008 توصیف گردید.

گونه‌ی جدید بروسلا اینوپیناتا اولین گونه‌ی‌ بروسلا با ترادف ژن منحصر به فرد 16s rRNA و تشابهات کمتر در ژن‌های مختلف و ژن‌های رمز دهنده (کد کننده) پروتئین‌های غشای خارجی (OMP) در‌مقایسه با تمامی دیگر گونه‌های شناخته شده بروسلا بوده و ازاین‌رو بی‌مانندترین گونه در درون این جنس می‌باشد.

آنالیز فنوتیپی سویه BO1^T:

آنالیز فتوتیپی سویه‌BO1^T، یعنی خصوصیات رشد در محیط‌های غذایی مختلف با درجات حرارت متفاوت، تولید گاز H2S، نیاز به گاز CO₂ جهت رشد، آگلوتیناسیون با آنتی‌سرم‌های مونواسپسفیک‌A (آبورتوس) و M (ملی‌‌تنسیس)، آنالیز اسید چرب سلولی، تلاشی (لیز) به‌وسیله‌ی باکتریوفاژ Tb و رشد درحضور رنگ‌های تیونین و فوشین درسال 2008 مورد بررسی قرارگرفته و درشرح گونه ارائه شده‌است. الگوی حساسیت به آنتی‌بیوتیک‌ها نیز بررسی شده‌است. خصوصیات فنوتیپی دیگر از‌جمله ویژگی‌های بیشتر رشد، مشخصات بیوشیمیایی با به‌کارگیری سیستم‌های جدید میکرو، ولیز با دیگر باکتریوفاژهای اختصاصی بروسلا (F1 وF25) همانند روش مورد استفاده برای بروسلا میکروتی تحت بررسی قرارگرفته‌اند. بررسی میکروسکوپ الکترونی نیز صورت پذیرفته است.

الگوی رشد سویه BO1^T مشابه بروسلا میکروتی با رشد بسیار سریع در 37‌درجهی‌ ‌سانتی‌گراد روی محیط‌های استاندارد مختلف چون آگار حاوی خون گوسفند ونوترینت آگار استاندارد (هر‌دو محیط از شرکت آکسوئید) می‌باشد. در محیط بروسلاآگار (مرک) رشد باکتری در‌خلال 6‌ساعت در 37درجه سانتی‌گراد با یا بدون گاز CO₂ قابل روئیت است. پرگنه‌های واحد1 تا میلی‌متری طی12‌تا24 ساعت تشکیل می‌شوند. در بررسی‌ میکروسکوپ الکترونی 1010- JEM با رنگ‌آمیزی منفی استات اورانیل1٪ و بزرگنمایی40000، سلول‌های باکتری فاقد فلاژل و به طور انفرادی یا دسته‌های نامنظم به قطر متوسط ۰/۵‌میکرومتر (میکرون) و طول1‌میکرومتر مشاهده می‌شود. سویه BO1^T به‌طور ضعیف با آنتی‌سرم مونواسپسفیک‌ـM تا رقت1 به 40 آگلوتینه شده ولی با آنتی‌سرم مونواسپسفیک‌ـA آگلوتینه نمی‌شود. اثر باکتریوفاژهای Tb (تی‌بی لیزی یا تفلیس)، F1 (فرینتز) و F25 در رقت 10⁴ برابر روتین تست (RTD×10⁴) به‌صورت لیز ناقص مشاهده شده اما دیگر رقت‌های فاژ‌ها تأثیری نداشته‌اند. این یافته بانتایج پیشین بدون اثر فاژ Tb درسال 2008 متناقض بوده، که ممکن است با رشد سریع سویه BO1^T قابل توصیف باشد. به‌منظور مشاهده اثر لیزفاژها ضروری است. دستورالعمل استاندارد برحسب مقادیر کمی باکتری و دوره‌های گرمخانه‌ اصلاح شود. به طور خلاصه، بوات‌های بروسلا آگار باید با 5 میلی‌لیتر بروسلا براس حاوی5 میکرولیتر از سوسپانسیون 10¹¹ سلول BO1^T کاملاً پوشیده شود. محیط اضافی بلافاصله دور ریخته شده، بوات‌ها به‌مدت 2‌ساعت در گرم‌خانه 37 درجه سانتی‌گراد خشک گردیده و بعد رقت‌های مختلف فاژ ریخته می‌شود. زمان گرمخانه 37‌درجه سانتی‌گراد برای اثر فاژ 12‌ساعت بوده و پس‌از این مدت لیزفاژ قابل‌انتظار خواهد بود.

همانند بروسلا میکروتی، سویه BO1^T قابلیت‌های متابولیک بالایی را درمقایسه با دیگر گونه‌های بروسلا نشان داده، در یک‌سری واکنش‌ها با آکروباکتروم آنتروپی LMG3331^T وآکروباکتروم اینترمدیوم LMG3301^T سهیم می‌باشد. نتایج واکنش‌های بیوشیمیایی افتراقی سویه BO1^T درمقایسه با دیگر گونه‌های بروسلا و بایووارهای آنها، و همچنین گونه‌های آکروباکتروم، در جدول1 خلاصه شده‌است. ازاین‌رو، گونه‌ی جدید بروسلا اینوپیناتا دومین گونه‌ی بروسلا با رشد سریع و فعالیت متابولیسم بالا می‌باشد.

کینون‌ها ولیپیدهای قطبی استخراج شده به‌وسیله‌ی تیندال وآلتن برگ وهمکاران مورد بررسی قرارگرفته‌اند. سیستم کینون متشکل از ترکیب اصلی اوبی‌کینون  (Q-10‌ (99٪ و او‌ بی‌کینون (Q-11(1٪ می‌باشد. لیپید قطبی ازپنج‌ترکیب اصلی: فسفاتیدیل اتانول آمین، فسفاتیدیل گلیسرول، دی‌فسفاتیدیل گلیسرول، فسفاتیدیل کولین و یک آمینولیپید ناشناخته تشکیل یافته است. آمینولیپید ناشناخته ویژگی‌های کروماتـــوگرافی آمیــنولیپیدAL1 ناشناخته موجود در تیپ سویه‌های بروسلا میکروتی، بروسلا ملی‌تنسیس و بروسلاآبورتوس را نشان‌ می‌دهد. علاوه برآن، مقادیر متوسط فسفاتیدیل مونومتیل اتانول آمین ومقادیر حداقل یا ناچیز یک آمینوفسفولیپید ناشناخته و یک فسفولیپید ناشناخته به ترتیب منطبق با APL2 و PL در بروسلا میکروتی شناخته شده‌است. چهار لیپید قطبی ناشناخته نیز موجود بوده است. یکی از این لیپیدهای ناشناخته ویژگی کروماتوگرافی لیپید L4 موجود در بروسلا میکروتی بوده اما دردیگر گونه‌ها وجود نداشته است. آمینولیپید AL2 موجود در بروسلا میکروتی به‌عنوان ترکیب اصلی در سویه BO1^T قابل‌شناسایی نبوده‌است. ازاین‌رو، الگوی لیپید به وضوح سویه BO1^T را از بروسلا میکروتی و همچنین بروسلا ملی‌تنسیس و بروسلا آبورتوس براساس وجود یا عدم وجود آمینولیپید ناشناخته AL2 و لیپید قطعی ناشناخته L4 متمایز می‌‌سازد. الگوی پلی‌آمین حاوی ترکیبات اصلی اسپرمیدین (45٪) و پوترسین/ پیش‌ساز پلی‌آمین اسپرمیدین (43٪) و مقادیر کمی‌1‌‌، 3‌ ـ دی‌امینوپروپان (7٪)، سیم ـ هومواسپرمیدین(1٪) اسپرمین(1٪) می‌باشد. این الگوی پلی‌آمین با دیگر گونه‌های بروسلا توافق خوبی دارد.

الگوی اسید چرب سلولی سویه BO1^T مشابه بروسلا آبورتوس، بروسلا ملی‌تنسیس، بروسلا نئوتومه، بروسلا اوویس و بروسلا سوئیس بوده که با مقادیر اصلی (۵-۴۶٪) C18:1w7C,C19:0 Cyclo11-12 C18:0 و C16:0 و مقادیر کمتر (1تا4٪) Br-C19:1 مشخص می‌شود الگوی حساسیت ضد‌میکربی سویهBO1^T قابل ‌مقایسه با دیگر گونه‌های بروسلا توصیف‌شده به‌وسیله‌ی جویت و همکاران، به استثنای مقاومت به سفالوسپورین‌های مختلف (سفوکسی‌تین، سفوتیام وسفوروکسیم، بوده‌است.