RASSF1A‌ هایپرمتیله‌ی موجود درگردش‌خون، مارکری نوین و مفید برای کنترل بیماران مبتلا به سرطان متاستاتیک پستان می‌باشد. موانع تکنیکی شامل تکه‌تکه‌شدن‌DNA موجود در جریان‌‌خون، نوسان در غلظت، غلظت پایین‌DNA تومور درگردش‌خون و موقعیت‌های متفاوت متیلاسیون در ژن‌RASSF1A میان بیماران مختلف است. یکی‌از روش‌های رایج شناسایی ژن هایپرمتیله شده، تبدیل سدیم بی‌سولفیت سیتوزین متیله‌نشده به اوراسیل به‌دنبال تشخیص با PCR است. با‌این‌حال، این روش به تبدیل کامل تمام سیتوزین‌های متیله‌ نشده وابسته بوده و موجب شکستن رشته‌ی DNA و از‌دست‌رفتن آن می‌شود. در روش جایگزین، آنزیم‌های محدودکننده‌ی حساس به متیلاسیون برای هضم DNA ژنومیک و همچنین DNA تیمار‌شده با سدیم بی‌سولفیت به‌کار رفته‌اند. محققان با نشاندارکردن مناطق مختلف‌RASSF1A با جفت پرایمرهای متفاوت‌PCR، منطقه‌ی ژنومیک متیله‌شده‌ی مقاوم به کلیواژ را با آنزیم‌های محدود‌کننده‌ی حساس به متیلاسیون Hpall و BstUl ارزیابی‌کرده و در صدد یافتن نواحی با حساسیت بالا در‌RASSF1A برآمدند که بتوان برای کنترل بیماری به‌کاربرد.

با اضافه‌کردن‌DNA کنترل غیرانسانی به سرم و جداسازی مقادیر اندک DNA تومور در جریان‌خون با ردگیری این DNA، کنترل به حدمطلوب رسید. با ارزیابی تولید آمپلیکون‌های‌PCR از DNA‌های تیمارشده با Hpall و BstUl که از ۲۴‌بیمار مبتلا به سرطان متاستاتیک پستان به‌دست‌آمده بود، ۴ناحیه با حساسیت ۶۳ ‌‌تا ‌۸۳‌درصد مشخص‌گردید. بررسی نمونه‌های بدست‌آمده از ۲۴فرد گروه کنترل، ویژه بودن ۱۰۰‌درصد این ۴ناحیه را نشان داد. از میان این ۴ناحیه، جفت اولیه که بیشترین کارایی PCR را داشتند برای کنترل غلظت RASSF1A در ۳۱ نمونه سرم جمع‌آوری شده، انتخاب گردید. سپس از DNA کنترل برای محاسبه‌ی غلظت RASSF1A تومور مستقل از نوسانات DNA غیرتوموری موجود در گردش‌خون استفاده شد. به‌عنوان شاهدی بر‌این اصل، بین کینتیک‌RASSF1A و نشانگرهای زیستی سرولوژیک سرطان‌CA 15-3،‌CEA و TPA، تطابق وجود دارد. آنزیم‌های محدودکننده‌ی حساس به متیلاسیون، می‌تواند رویکرد متدولوژیکال مفیدی برای کنترل RASSF1A هایپرمتیله‌شده‌ی موجود در گردش‌خون بیماران مبتلا به سرطان متاستاتیک پستان باشد.  

Ref:National  Center for  Biotechnology information